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4S GelRed核酸染料是一种灵敏度高、稳定性高、安全性高的荧光核酸凝胶染色试剂(在工作浓度中)，能与DNA静电结合。与EB相比，4S GelRed不能透过细胞膜而进入细胞内。Ames测试法显示，该染色剂的诱变性远远小于EB。4S GelRed与EB有相同的光谱特性，可用和观察EB染色相同的普通紫外凝胶透射仪观察。

• 无毒性：无法穿透细胞膜而进入细胞。
  
• 高灵敏性：灵敏度高，对核酸的迁移影响小于SYBR Green I。
  
• 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
  
• 操作简单：无需脱色或冲洗。
  
• 适用性强：可选择凝胶染色法和泡染法；适用于琼脂糖凝胶或丙烯酰胺凝胶电泳；可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。
  
• 使用方便：与EB的使用方法相似，无需更换Buffer及检测设备。

• 推荐使用1X TBE，因含硼酸盐的试剂导电性能更好；
  
• 电泳时电压不宜过高，一般TBE不超过120V，TAE不超过100V。
  
• 由于产品性质稳定，为避免产生沉淀，该染料无需冷藏，请于室温下储存；若出现沉淀，请将染料加热至45～50℃，2min，并搅拌溶解，此方法不影响使用效果。
  
• 4S GelRed虽然无毒无致癌性，但对皮肤和眼睛仍有少量的刺激作用，因此，实验过程中请戴手套和口罩操作。

• 胶染法(前染，方法同EB)
  
  • 制备琼脂糖凝胶溶液，加热溶解；
    
  • 加入4S GelRed核酸染料(10000X水溶液)，例如每50mL琼脂糖凝胶溶液中加入5μL 4S GelRed，以此比例类推；由于4S GelRed具有良好的热稳定性，故可在热的琼脂糖溶液中直接添加；
    
  • 摇晃、震荡或翻转保证染色剂充分混合，铺胶；
    
  • 电泳并用紫外投射仪观察结果。
    注意：
    ① 鉴于4S GelRed的高灵敏性，建议减少DNA上样量。推荐已知浓度的样品，上样量为50～200ng/泳道。对于未知浓度的样品，尝试1/2或1/3的常用上样量。若实验需要酶切或大浓度的上样量，如胶回收实验，推荐使用泡染法。
    ② 如果总看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关。请尝试：
    
    • 降低琼脂糖浓度；
      
    • 选用更长的凝胶；
      
    • 延长凝胶时间以保证边缘清晰；
      
    • 改进上样技巧或选择泡染法染色。
    ③ 此方法不适合预制丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
• 泡染法(后染)
  
  • 常规方法电泳
    
  • 制备3X染色液：用水将染色剂稀释3,300倍到0.1M NaCl中。
    例如：将15μL 4S GelRed和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中。
    
  • 将3X染色液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染色剂避光。室温振荡染色30min，染色时间因凝胶浓度和厚度而定，对于含3.5～10%丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
    注意：
    ① 用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
    ② 3X染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。